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小動物學習記憶行為檢測方法
日期：2024-12-07 12:14
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摘要：
小動物學習記憶行為檢測方法
小動物學習記憶行為檢測技術----避暗法
小動物學習記憶行為檢測技術----避暗法
一、實驗目的
1、學習小白鼠學習記憶行為檢測方法
2、學習小鼠避暗自動測試儀的使用方法。
3. 了解影響學習記憶功能的一些因素。
二、實驗原理
嚙齒類動物系夜行性動物，喜歡黑暗的地方，而回避光亮之地。它將設法逃向暗處，此時在暗處給予其電刺激，小鼠會被迫逃回明亮處，并獲得記憶。根據(jù)此原理設計的實驗為一次性被動回避反應實驗。
被動回避反應(Passive Avoidance Response)為二十世紀60年代后期發(fā)展起來的、普遍用于檢測小動物學習記憶能力的一種動物模型。反應特征：動物必須學會躲避可怕的事件，而抑制其天然本性。被動回避反應有：避暗法（又稱步入法step-through test）、跳臺法（又稱步下法step-down test）等。
三、實驗器材
小白鼠常用手術器械、亞**鈉、東莨菪堿（scopolamine，Scop.）、生理鹽水、35 %酒精。
四、實驗步驟
1. 實驗儀器
小鼠避暗自動測試儀由控制器和活動箱兩部分組成，可同時對6只小鼠進行實驗。明暗實驗箱之間有一小門供動物進出，當動物進入暗室被電擊時，它可自動記錄小鼠**次從明室進入暗室的潛伏期和受到電擊的次數(shù)，還可通過按鍵靈活地選擇刺激電壓和設置實驗時間。
2. 實驗程序：
2.1適應：將動物頭朝室壁放入明室，兩室之間的門洞敞開，讓動物在兩室內自由活動2-3分鐘，取出后放回飼養(yǎng)籠。
2.2訓練：**天, 將動物放入明室, 它很快鉆入暗室, 連接兩室的門洞關閉，同時啟動電刺激器, 動物足部受電擊。如果動物在**次訓練時超過100秒不進暗室, 淘汰之或用手把它輕輕趕進暗室。
記錄指標：
（1）記錄動物自明室進入暗室的潛伏期，可作為判斷給藥后動物行為是否有變的一個指標。若**致使動物**，則潛伏期顯著長于對照組。
（2）記錄動物受到電擊后的反應，如劇烈嘶叫并跳躍，評為A級反應；微弱尖叫，評為B級反應；不叫，評為C級反應。受到電擊后動物一般均跳躍。C級反應常伴動物跳躍，動物雖不尖叫，但正常動物均能感受電擊疼痛，顯示好的記憶成績。C級反應多見于雄性動物。A級反應多見于雌性動物。該記錄可作為動物痛域是否變化的一個輔助觀察指標。
2.3重測試：訓練后24小時（第三天），再次將動物放入明室，進行重測試。
記錄指標：
（1）記錄動物進入暗室的潛伏期，為步入潛伏期（step through latency, STL）。*大潛伏期設為300秒。
（2）記錄動物300秒內進入暗室的錯誤次數(shù)，包括**次錯誤進入暗室的次數(shù)。
實驗設計舉例
按照信息論將記憶簡單劃分為：記憶的獲得（也即學習過程、信息的獲得過程）、記憶的鞏固（信息的保持過程）、記憶的再現(xiàn)（信息的提取過程）時，我們可依此來篩選作用于記憶不同階段的認知**。
在訓練前、后或重測前給損傷動物記憶的**，可分別觀察該**對記憶不同階段的影響，在此之前給動物待檢測認知**，即可依據(jù)實驗結果判斷該認知**對抗損傷**的效果。為簡化篩選工作，常選用實驗步驟較少的小動物學習記憶測試方法，現(xiàn)以步入法為例說明如下。
一、記憶獲得過程
1. 建立記憶獲得障礙模型：
在動物進行電擊訓練之前15-20分鐘，給動物腹腔注射氫溴酸東莨菪堿（膽堿能M受體拮抗劑，HBr-Scopalamine），小鼠：3mg/kg，可見給藥組動物出現(xiàn)探究行為，訓練時在明室內駐留時間略長于對照組，進入暗室后受到電刺激時的反應與對照組相似：嘶叫或跳躍。24小時后當再次將動物放入明室時，動物進入暗室的潛伏期顯著低于對照組，即制備成功記憶障礙模型。
2. 待測**的服用：
根據(jù)待檢測**在動物體內的作用高峰時間，于相應時間給動物服藥，如口服**，可于訓練前1小時給動物灌服待檢測**，然后再于訓練前15-20分鐘給動物損傷記憶獲得的**，如氫溴酸東莨菪堿等。
二、記憶鞏固過程
1. 建立記憶鞏固障礙模型：
動物電擊訓練結束后立即給動物腹腔注射蛋白質合成抑制劑環(huán)己酰亞胺（Cycloheximide，小鼠：90-100mg/kg）抑制蛋白質合成，或皮下注射NaNO2(小鼠：120mg/kg)導致動物短暫性缺氧，或給動物施行頭部瞬間電休克。然后放回飼養(yǎng)盒內，24小時后重測試。
2. 待測**的服用：
若是口服**，于電擊訓練前**作用高峰期（一般選1小時前）給動物灌服**。若是腹腔注射**，一般于訓練前半小時注射。然后給動物電擊訓練，訓練后立即給損傷記憶鞏固**或其它實驗因素，24小時后重測試，可檢測認知**對記憶鞏固障礙的對抗作用。
三、記憶再現(xiàn)過程
1. 建立記憶再現(xiàn)障礙模型
于動物重測試之前15分鐘給小鼠灌服酒精（35%，0.1ml/10g鼠重），15分鐘后進行重測試。可見小鼠記憶提取過程受到損傷。
2. 待測**的服用：于動物重測試之前1小時給動物口服待檢**。
注意：
該損傷只有在重測前10-30分鐘灌胃酒精才起作用, 時間長于30分鐘則無效。
該劑量酒精只對較不鞏固、一次性記憶有損傷作用，而對小鼠需經多次訓練而獲得的較鞏固的記憶的再現(xiàn)無影響。
附：步下法(step-down test)，又稱跳臺法
實驗原理：
依據(jù)動物的習性，嚙齒類動物在空曠的場地內，大多時間會逗留于墻邊或角落。而被放在高臺上時，便會依本能迅速跳下，躲避在墻邊或墻角。跳臺儀的底部可以通電，上面放置一個絕緣的跳臺。動物在訓練時受到電擊，跳上跳臺以躲避電擊，從而獲得記憶。動物的記憶力下降時，表現(xiàn)為**次從跳臺跳下的潛伏期縮短，跳下的次數(shù)增加。動物的記憶力增強時則跳下的潛伏期延長，觸電次數(shù)明顯減少。
實驗程序
1. 適應：將動物放上平臺，使動物在箱內自由上下適應2-3分鐘，然后將動物放回飼養(yǎng)盒?；蛎看芜m應10秒，共適應3次，間隔30分鐘。后者使動物較前者更能充分適應實驗者的手勢和整個實驗過程。
2. 訓練：可在適應之后立即進行，也可在適應后24小時進行。
將動物再次放上平臺, 同時開啟電刺激器, 箱底銅柵供電。動物由于在箱內適應過，幾乎馬上跳下平臺，四肢于是立即遭到電擊。由于電擊的疼痛，動物上下跳躍，偶爾于無意之中跳回平臺，旋即又跳下平臺，如此反復多次。
記錄指標：
1）動物從放上平臺至跳下平臺的潛伏期；
2）動物反復下臺的錯誤次數(shù), 可代表動物的學習成績；
3. 重測試：
訓練后24小時重測試, 再次將動物放上平臺，觀察動物下臺情況。
記錄指標：
動物自放上平臺后至跳下平臺的潛伏期、5 分鐘內跳下平臺的錯誤次數(shù), 此為動物的記憶成績。
