亞急性衰老動(dòng)物模型制作方法

基本原理：在一定時(shí)間內(nèi)連續(xù)給動(dòng)物注射D-半乳糖，使機(jī)體細(xì)胞內(nèi)半乳糖濃度增高，在醛糖還原酶催化下，還原為半乳糖醇，這種物質(zhì)不能被細(xì)胞進(jìn)一步代謝而堆積在細(xì)胞內(nèi)，影響正常滲透壓，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹，功能障礙、代謝紊亂，破壞并消耗機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)，使自由基積聚。同時(shí)在半乳糖還原成半乳糖醇的過程中又產(chǎn)生（O2-），這樣使細(xì)胞膜脂質(zhì)受損，過氧化脂質(zhì)、脂褐質(zhì)等增高，出現(xiàn)衰老。
操作步驟：
取健康雌性小鼠，普通飼料常規(guī)喂養(yǎng)。模型組小鼠每天頸背部皮下注射D-半乳糖（0.25ml/10g），連續(xù)6～8周后，小鼠行動(dòng)遲緩，毛色灰暗，形體瘦弱，呈現(xiàn)明顯的衰老體征，即造成亞急性衰老模型?？瞻讓?duì)照組同樣每天皮下注射生理鹽水（0.25ml/10g）。末次給藥和D-半乳糖2h后，進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)（避暗實(shí)驗(yàn)），次日測(cè)定記憶成績，然后眼眶取血后處死。取小鼠胸腺、脾、腦、肝和心臟組織，測(cè)定各項(xiàng)衰老指標(biāo)。
避暗實(shí)驗(yàn)（step through test）：反射箱分單獨(dú)5個(gè)箱，每個(gè)箱大小為36cm×12cm×12cm ，分明暗兩室。明室由透明有機(jī)玻璃構(gòu)成，暗室底部安銅柵，通以36V電流，明暗兩室之間有一直徑為3cm洞口，反射箱通過連線與微機(jī)連接，由微機(jī)控制記錄動(dòng)物從明室通過洞口進(jìn)入暗室的潛伏期。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠面部背向洞口放入明室，同時(shí)開始計(jì)時(shí),動(dòng)物穿過洞口進(jìn)入暗室受到電擊，計(jì)時(shí)自動(dòng)停止。取出小鼠，記錄小鼠從明室入暗室的潛伏期和5min內(nèi)的電擊次數(shù)，此為訓(xùn)練成績。24h后再測(cè)為測(cè)試成績。
測(cè)定指標(biāo)：
1、體重
2、臟器指數(shù)（胸腺、脾、肝和腦的臟器指數(shù)）
臟器指數(shù)=臟器重量/體重×100%
3、抗氧化指標(biāo)
血液：MDA、SOD和MAO
肝和腦：MDA
腦：MAO
注意事項(xiàng)：
1、選擇雌性小鼠，因?qū)嶒?yàn)周期長，雄性鼠長期群居，好咬斗易造成受傷影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2、注射給藥必須無菌操作，鼠籠墊料與飲水壺定時(shí)換洗，保持清潔，因給藥時(shí)間較長，機(jī)體逐漸老化，功能狀態(tài)漸差。