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文章詳情
瑞香狼毒提取物抗實(shí)驗(yàn)性癲癇篩選研究
日期：2024-12-07 12:14
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摘要：
瑞香狼毒提取物抗實(shí)驗(yàn)性癲癇篩選研究
【摘 要】 目的 對(duì)瑞香狼毒六種提取物(依次為瑞香狼毒水、生離物、丙酮、石油醚、乙迷、乙醇提取物)進(jìn)行藥效學(xué)及毒性比較研究, 篩選出一種高效低毒的抗癲癇化合物, 便于臨床前機(jī)制探討。方法 采用動(dòng)物三種驚厥模型, 測定瑞香狼毒六種提取物抗實(shí)驗(yàn)性癲癇半數(shù)有效量(ED50)。計(jì)算其半數(shù)致死量(LD50)。結(jié)果 瑞香狼毒提取物Ë～ Î , 即丙酮、石油醚、乙迷、乙醇四種提取物對(duì)小鼠*大電休克發(fā)作實(shí)驗(yàn)(M ES)、戊四唑驚厥實(shí)驗(yàn)(M ET)和電刺激大鼠皮層驚厥閾值(TL S)模型均具有較強(qiáng)的對(duì)抗作用。而其中丙酮提取物毒性較低, **指數(shù)高達(dá) 1419。結(jié)論 瑞香狼毒丙酮提取物是一種抗驚厥作用較強(qiáng)而毒性小的有希望的抗癲癇化合物。
【關(guān)鍵詞】 癲癇; 瑞香狼毒, 提取物; 篩選
自發(fā)現(xiàn)狼毒大戟堿性提取液具有較強(qiáng)的抗驚厥、抗癲癇作用以來, 又進(jìn)一步對(duì)瑞香狼毒(Stellera cham aejasm e L. , 為瑞香科植物; 藥用其根 radix stellerae)進(jìn)行了大量基礎(chǔ)研究, 發(fā)現(xiàn)瑞香狼毒具有更強(qiáng)的抗驚厥、抗癲癇活性, 但迄今為止,尚未見抗驚厥、抗癲癇方面的報(bào)道。本文通過瑞香狼毒六種提取物抗實(shí)驗(yàn)性癲癇作用半數(shù)有效量(ED50)及測定其半數(shù)致死量(LD50) , 篩選出高效低毒化合物丙酮提取物, 便于進(jìn)一步臨床前機(jī)制研究。
1 材 料
111 動(dòng)物: 昆明種小鼠 660 只, 6～ 8 周齡, 體重(22±4) g,雌雄皆用。雌性大鼠72 只, 3～ 4 個(gè)月齡, 體重(180±20) g,皆由本校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
112 藥品及配制: 瑞香狼毒水、生離物、丙酮、石油醚、乙迷、乙醇六種提取物(提取物: É～ Î )均由沈陽藥科大學(xué)提供。實(shí)驗(yàn)前水提物、生離物、丙酮提取物用蒸餾水配制; 石油醚、乙迷、乙醇提取物用蒸餾水加 2%吐溫 013 mL 配成不同濃度混懸液。戊四唑(met razo l)由荷蘭癲癇研究中心惠購, 實(shí)驗(yàn)前用蒸餾水配成所需濃度。
113 儀器: *大電休克驚厥實(shí)驗(yàn)用電驚厥儀; 電刺激大鼠皮層驚厥閾值測定采
用驚厥閾值自動(dòng)測定儀。
2 方 法
211 抗實(shí)驗(yàn)性癲癇作用
21111 *大電休克驚厥實(shí)驗(yàn)(maximal elect ro shock seiz2ure test,M ES) : 采用Sw inyard 法稍加改良。用兩個(gè)耳電極夾住動(dòng)物兩耳尖部, 然后通以 8 Hz, 110 V 交流電刺激 013s, 以后肢強(qiáng)直與否為觀察指標(biāo)[1 ]。實(shí)驗(yàn)前 24 h 篩選動(dòng)物,凡刺激未見后肢強(qiáng)直或反應(yīng)不明顯小鼠棄之不用。將合格小鼠分為 5 組, 每組 10 只, 分別腹腔注射不同劑量同一待測提取物混懸液, 2 h 后測定其抗M ES 效應(yīng), 以B liss 法計(jì)算瑞香狼毒六種提取物抗M ES ED50值及 95%可信限。
21112 戊四唑驚厥實(shí)驗(yàn)(met razo l seizure test,M ET ) : 將合格小鼠分為 6 組, 每組 10 只, 其中 5 組分別腹腔注射不同劑量同一待測提取物混懸液, 正常對(duì)照組腹腔注射等容量蒸餾水加2%吐溫, 2 h 后腹腔注射戊四唑100 mgö kg, 以待測提取物能否防止戊四唑引起的全身陣攣性驚厥為指標(biāo), 觀察5m in。正常對(duì)照組小鼠注射戊四唑后50 s 內(nèi)全部出現(xiàn)陣攣性驚厥。計(jì)算六種提取物抗M ET ED50及95%可信限。
21113 電刺激大鼠皮層驚厥閾值測定 ( th resho ld fo rlocalized seizure, TL S) : 將實(shí)驗(yàn)大鼠烏拉糖5 mLö kg 腹腔注射麻醉后固定于動(dòng)物腦立體定位儀上, 施行無菌手術(shù)。按照Vo skuyl 等[2 ]實(shí)驗(yàn)方法, 將兩根直徑112 mm 不銹鋼電極植入腦兩側(cè)額葉皮層運(yùn)動(dòng)區(qū), 牙托水泥固定。術(shù)后1 周采用電刺激驚厥閾值自動(dòng)測定儀測定大鼠驚厥閾值。刺激參數(shù): 單向斜坡梯形雙極脈沖; 波寬2 m s; 強(qiáng)度15 s 內(nèi)從0～ 1 000 L A , 每日定時(shí)刺激2 次, 使大鼠出現(xiàn)前肢痙攣或面部顫動(dòng)和半側(cè)軀體痙攣時(shí)立即停止刺激, 以此刺激強(qiáng)度(L A )為驚厥閾值。連續(xù)刺激1 周, 驚厥閾值穩(wěn)定后用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分3 組, 每組6只, 均刺激3 次, 取其均值為藥前驚厥閾值。之后分別腹腔注射不同劑量(原生藥劑量相同)同一待測提取物Ë～ Î 混懸液, 藥后2 h 按藥前相同參數(shù)刺激, 記錄其升高閾值。
212 LD50測定
將健康小鼠分 5 組, 每組 10 只, 腹腔注射不同劑量同一待測提取物混懸液, 觀察 24 h 小鼠死亡數(shù)。B liss法計(jì)算瑞香狼毒提取物Ë～ Î LD50。
213 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
結(jié)果用x q±s 表示, 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用u 檢驗(yàn)、析因分析。
3 結(jié) 果
311 抗M ES 效應(yīng)(ED50) : 見表1。瑞香狼毒六種提取物中丙酮、石油醚、乙迷、乙醇四種提取物均能有效對(duì)抗小鼠M ES, 且對(duì)M ES 具有劑量依賴性對(duì)抗作用。
312 抗M ET 效應(yīng)(ED50) : 見表1。瑞香狼毒六種提取物中丙酮、石油醚、乙迷、乙醇四種提取物對(duì)M ET 亦有不同程度的對(duì)抗作用, 且對(duì)M ET 具有劑量依賴性作用。
313 抗 TL S 效應(yīng): 提取物Ë , 劑量為 60、 90、 120 mg 的升高閾值分別為 141±49、 256±83、 305±81; 提取物Ì , 劑量為 500、 750、 1 000 mg 的升高閾值分別為 141±49、 198±70、 244±62; 提取物Í , 劑量為 160、 240、 320 mg 的升高閾值分別為 168±79、 305±90、 277±119; 提取物Î , 劑量為400、 600、 800 mg 的升高閾值分別為152±45、 136±89、 261±94。四種提取物的中劑量組與低劑量組比較P < 0101, 高劑量組與低劑量組比較P < 01001。四種提取物亦能提高大鼠TL S, 且同一提取物呈量2效正相關(guān)。
314 LD50測定: 見表1。四種提取物中, 丙酮提取物毒性較低, 其LD50與石油醚、乙迷、乙醇提取物相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0101) , **指數(shù)高達(dá) 1419。
4 討 論
本實(shí)驗(yàn)**發(fā)現(xiàn)瑞香狼毒具有抗癲癇活性。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 瑞香狼毒六種提取物中, 丙酮、石油醚、乙迷、乙醇四種提取物均能有效對(duì)抗小鼠*大電休克驚厥發(fā)作, 對(duì)戊四唑驚厥亦有不同程度的對(duì)抗作用。四種提取物亦能提高電刺激大鼠皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)誘發(fā)驚厥的驚厥閾值, 且同一提取物呈量2效正相關(guān), 進(jìn)一步肯定了其抗驚厥作用。毒性試驗(yàn)(表 1)顯示了四種提取物中, 丙酮提取物毒性較低, 其LD50與石油醚、乙迷、乙醇提取物相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0101)。**指數(shù)高達(dá)1419。
以上結(jié)果充分表明, 瑞香狼毒為一有希望前途的***, 有望通過高科技手段對(duì)該藥有效抗癲癇成分丙酮提取物進(jìn)一步分離提取, 分析其化學(xué)結(jié)構(gòu), 為定向半合成抗癲癇新藥奠定物質(zhì)基礎(chǔ)和提供理論依據(jù)。
