摘 　要:目的:觀察缺血前期電針對大腦中動脈缺血再灌注模型大鼠智能的影響,并探討其作用機理。方法:選用實驗用SD大鼠45只,分為假缺血組、模型組、缺血前期電針組,通過避暗試驗觀測其行為,并于術后12h處死大鼠,檢測其患側(cè)海馬膽堿酯酶活力。結(jié)果:和模型組相比,缺血前期電針組避暗實驗潛伏期延長,錯誤次數(shù)均減少,并且提高海馬膽堿酯酶活力。結(jié)論:缺血前期電針能改善局部的血液循環(huán),促使神經(jīng)功能的恢復,具有防治缺血性中風及保護腦缺血再灌注損傷的作用。提示臨床早期電針防治中風智能障礙具有積極意義。

關鍵詞:電針;足三里;百會;環(huán)跳;腦缺血再灌注;智能;膽堿酯酶;避暗實驗;大鼠

　　腦血管**是危害人類生命和健康的常見病和多發(fā)病,其中缺血性中風(AIS) 占有相當大的比例(75 %～85 %) 。西醫(yī)**中風在基礎研究方面取得了較大的進展, 但臨床治

療進展不大, 目前尚缺乏特效的****和方法。針灸療法已從對中風后遺癥期和恢復期的**進入到了對急性期的**, 但是在超早期**方面的系統(tǒng)研究還有待完善。本實驗

通過觀察缺血前期(缺血后即刻) 電針對大腦中動脈缺血再灌注模型大鼠智能的影響, 并探討其作用機理, 從而探索一種**、有效、方便, 可用于中風早期改善智能的方法。

1　動物分組及模型制備

選用實驗用SD大鼠45只, 清潔級, 雄性, 體重300±50g。上海中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。采用完全隨機法分為3組, 即假缺血組、模型組、缺血前期電針組, 每組各15只。參照Zea - longa的方法制備大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型(MCAO) 。缺血115h后拔出栓線, 使缺血區(qū)血流再灌。假缺血組進行手術至插栓線前。

2　**方法

①假缺血組、模型組: 同樣抓取, 不進行**。②缺血前期電針組: 栓線插入開始**。選百會、曲池、環(huán)跳、足三里(患側(cè)) , 用G6805電針儀, 采用疏密波, 頻率為4～20Hz , 在示波器監(jiān)視控制下的電流強度為3mA , **30min。

3　測試指標

311　避暗試驗(step - throughtest) 　測試大鼠被動回避反應。大鼠避暗反應儀分為明、暗兩室。明室上方以鎢燈照明, 暗室的底部銅柵通以38V交流電, 兩室之間設有一直徑4cm的

圓孔。術前12h將各組大鼠分別放入明室, 利用大鼠嗜暗的特性讓其鉆入暗室, 然后關閉小門, 進行通電、電擊30s后放出。反復進行2次使其獲得記憶。在術后斷頭之前進行測

試, 記錄大鼠10min內(nèi)進入暗室的次數(shù)作為錯誤次數(shù), **次進入的時間為潛伏期。312　缺血側(cè)海馬膽堿酯酶(CHE) 　術后12h , 大鼠斷頭后迅速取缺血側(cè)海馬(012～1g) , 然后如下步驟操作。①在冰冷生理鹽水中漂洗, 除去血液, 濾紙拭干, 稱重, 用移液管取冷生理鹽水(重量是組織塊的9倍) , 放于10ml試管中,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。②勻漿: 用高速勻漿機1000轉(zhuǎn)Pmin上下研磨制成10 %組織勻漿液。 ③離心: 將制備好的10 %勻漿液用離心機3000轉(zhuǎn)Pmin離心15min , 取上清液置于10ml試管中, 凍在- 20℃待檢。④待收集完樣品, 統(tǒng)一采用721可見分光光度計測定, 用考馬斯亮藍測定蛋白含量。

4　實驗結(jié)果

411　各組大鼠海馬膽堿酯酶的變化 　。假缺血組和缺血前期電針組相比, 無顯著差異( P> 0105) (注: 膽堿酯酶活力不符合正態(tài)分布, 故采用了對數(shù)轉(zhuǎn)換進行了校正) 。

412　各組大鼠避暗試驗(step - throughtest) 結(jié)果 　缺血前期電針組與假缺血組相比, 有升高趨勢, 但沒有顯著

差別( P> 0105) 。

5　討論

通過避暗實驗我們發(fā)現(xiàn), 缺血前期電針可改善模型大鼠學習記憶能力, 從行為學的角度提供了其臨床**缺血性中風的實驗依據(jù)。海馬為大腦邊緣系統(tǒng)的重要組成部分, 在學習、記憶等**神經(jīng)活動中起重要作用。海馬的正常結(jié)構(gòu)和機能與學習記憶機能密切相關。雙側(cè)海馬或優(yōu)勢半球海馬病變時, 可出現(xiàn)明顯的學習記憶障礙。實驗表明, 損毀雙側(cè)海馬嚴重影響大鼠空間作業(yè)的認知能力, 并可導致迷宮學習的嚴重障礙。海馬是對腦缺血*敏感的部位之一。**膽堿能神經(jīng)及神經(jīng)纖維廣泛分布于運動和感覺系統(tǒng)、腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、邊緣系統(tǒng)及大腦皮層, 有促進學習記憶、激活腦電、維持覺醒、參與精神意識活動等重要生理功能。隨著神經(jīng)化學、神經(jīng)遞質(zhì)生物學和分子生物學的發(fā)展,人們逐漸發(fā)現(xiàn)神經(jīng)遞質(zhì)的異常在缺血性腦損傷中起重要作用。乙酰膽堿(Acetylchdine , ACh) 是發(fā)現(xiàn)*早的經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì), 但它在腦缺血時的變化研究甚少。Phillis

應用皮層

透析杯技術和HPLC測定腦缺血后ACh釋放量, 發(fā)現(xiàn)腦缺血后ACh釋放量很快上升。有研究也發(fā)現(xiàn)腦缺血后大腦皮層ACh含量下降, ACh 釋放量上升。乙酰膽堿酯酶(AChE) 是ACh的降解酶, 它的活性改變直接說明ACh的降解情況。AChE的存在并不能完全代表膽堿能神經(jīng)分布, 但目前報道公認AChE活性部位是ACh的陽性部位, 廣泛用于判斷膽堿能神經(jīng)的活性。本實驗研究發(fā)現(xiàn)電針干預組AChE活性均趨于假缺血組, 而模型組下降, 因此ACh的降解減弱, ACh 在突觸間隙堆積增加, 其突觸后效應必然放大, 推測可能與缺血性腦損傷有關。而電針干預組卻與假缺血組持平, 體現(xiàn)了電針的作用。缺血前期電針干預作為超早期防治, 是有效的, 可以降低缺血再灌注損傷, 改善其智能, 這對于臨床是有著重要意

義的。但還有待于進一步臨床觀察驗證。特別是在臨床上要注意根據(jù)病人的體質(zhì)等因素, 綜合判斷理想**方案。