地黃益知浸膏對老年性癡呆大鼠海馬磷酸化creb、gsk-3β表達(dá)的影響穿梭、穿梭實(shí)驗(yàn)、穿梭箱、shuttlebox、主動回避實(shí)驗(yàn)、active avoidancesystem

穿梭、穿梭實(shí)驗(yàn)、穿梭箱、shuttlebox、主動回避實(shí)驗(yàn)、active avoidancesystem

【摘要】 目的 觀察地黃益知浸膏（dihuang yizhi jingao,dhyzjg）對老年性癡呆（ad）大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及海馬組織環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)單元結(jié)合蛋白(cyclicamp response element-binding protein，creb)、pcrebser133、糖原合成酶激酶 (glycogen synthase kinase，gsk)-3β、pgsk-3βser9表達(dá)的影響，探索其防治ad的可能機(jī)制。方法 采用右側(cè)海馬注射β淀粉樣肽（aβ）25～35制備ad大鼠模型，用穿梭箱及水迷宮檢測其學(xué)習(xí)記憶能力；應(yīng)用**印跡法測定其creb、gsk-3β的磷酸化水平。結(jié)果 dhyzjg可劑量依賴性地改善ad大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力;與ad組相比,dhyzjg高劑量組海馬pcrebser133水平顯著增高 (p＜0.01),pgsk-3βser9水平明顯增高(p＜0.05)。結(jié)論 dhyzjg可明顯改善ad大鼠認(rèn)知功能障礙,其機(jī)制可能與其上調(diào)海馬creb、gsk-3β蛋白的磷酸化水平有關(guān)。穿梭、穿梭實(shí)驗(yàn)、穿梭箱、shuttle box、主動回避實(shí)驗(yàn)、active avoidance system

【關(guān)鍵詞】 地黃益知浸膏；老年性癡呆；環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)單元結(jié)合蛋白(creb)；糖原合成酶激酶(gsk)-3β

穿梭、穿梭實(shí)驗(yàn)、穿梭箱、shuttle box、主動回避實(shí)驗(yàn)、active avoidance system

　　老年性癡呆(ad) 屬于一種起病隱匿的進(jìn)行性發(fā)展的癡呆，是癡呆中*常見的一種進(jìn)展性腦變性**。淀粉樣蛋白沉積、神經(jīng)纖維纏結(jié)、神經(jīng)元丟失是ad的主要病理改變。近年來發(fā)現(xiàn)，環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)單元結(jié)合蛋白(cyclicamp response element-binding protein,creb) 是細(xì)胞內(nèi)多種信號通路的一種關(guān)鍵成分，其蛋白磷酸化水平的變化可影響神經(jīng)元突觸可塑性和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的形成〔1，2〕。糖原合成酶激酶(glycogen synthase kinase，gsk)-3β是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶,其廣泛存在于各種細(xì)胞中,參與多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié),在tau蛋白磷酸化調(diào)節(jié)中起非常重要的作用 〔3〕。體外研究表明aβ可明顯抑制培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中的長時程增強(qiáng)電位及pka/creb介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，激活gsk-3β并以gsk-3β依賴的方式引起神經(jīng)元丟失〔4，5〕。地黃益知浸膏（dihuang yizhi jingao，dhyzjg）是采用重慶名中醫(yī)王輝武教授提供的驗(yàn)方所制,在臨床**中具有改善和延緩ad認(rèn)知衰退的作用。目前,dhyzjg對ad尤其是其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用機(jī)制尚不清楚。本研究旨在以淀粉樣蛋白級聯(lián)假說為切入點(diǎn),觀察dhyzjg是否能調(diào)節(jié)ad大鼠行為學(xué)及海馬creb、gsk-3β蛋白的磷酸化水平，探討dhyzjg是否通過改善腦組織神經(jīng)元存活信號途徑的功能以及蛋白激酶／蛋白磷酸酯酶磷酸化系統(tǒng)失衡而發(fā)揮**ad的作用。穿梭、穿梭實(shí)驗(yàn)、穿梭箱、shuttle box、主動回避實(shí)驗(yàn)、active avoidance system

　　1 材料與方法穿梭、穿梭實(shí)驗(yàn)、穿梭箱、shuttle box、主動回避實(shí)驗(yàn)、active avoidance system

　　1.1 實(shí)驗(yàn)動物分組 wistar大鼠，雄性96只,體重(250±20)g,第三軍醫(yī)大學(xué)野戰(zhàn)外科研究所實(shí)驗(yàn)動物中心提供，清潔級。經(jīng)穿梭箱訓(xùn)練粗篩后,淘汰6只，隨機(jī)均分為假手術(shù)組、模型組、dhyzjg低、中、高劑量組、多奈哌齊（donepezil）組,每組15只。dhyzjg由熟地黃、山茱萸、石菖蒲、遠(yuǎn)志、巴戟天等8味中藥（重慶漢邦天然藥業(yè)有限公司）組成,重慶中藥研究所鑒定為純正中藥材,并由該研究所經(jīng)水煮醇提法,制成中藥流浸膏（1 g流浸膏相當(dāng)于2g生藥含量）。置0～4℃ 冰箱保存。在實(shí)驗(yàn)前對dhyzjg流浸膏進(jìn)行毒理實(shí)驗(yàn),ld50＞50g（生藥）/kg。穿梭、穿梭實(shí)驗(yàn)、穿梭箱、shuttle box、主動回避實(shí)驗(yàn)、active avoidance system

　　1.2 方法穿梭、穿梭實(shí)驗(yàn)、穿梭箱、shuttle box、主動回避實(shí)驗(yàn)、active avoidance system

　　1.2.1  主要試劑與儀器  多奈哌齊由衛(wèi)材(中國)藥業(yè)有限公司提供;creb 抗體，pcrebser133抗體、pgsk-3βser9抗體均為cellsignaling公司產(chǎn)品；gsk-3β抗體購自北京博奧森試劑公司;aβ25～35為首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院多肽室提供；β-actin抗體均為santacruz公司產(chǎn)品；凝膠掃描成像系統(tǒng)(bio-rad公司，美國);電腦控制的穿梭箱系統(tǒng)（第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所）、大鼠腦立體定位儀%