[摘　要]　目的: 探討急性*大電休克和慢性經(jīng)耳電點(diǎn)燃癲癇對(duì)大鼠學(xué)習(xí)和記憶的影響。方法: 通過雙耳夾給予大鼠電刺激(150mA, 0. 2 s)誘發(fā)急性*大電休克(M ES), 而慢性經(jīng)耳電點(diǎn)燃癲癇,是經(jīng)雙耳夾每24h給予大鼠一次亞驚厥劑量電刺激(40mA, 0. 2 s)直至完全點(diǎn)燃。采用八臂迷宮(四臂放餌)研究大鼠空間學(xué)習(xí)能力和記憶再現(xiàn)能力。高效液相色譜分析法(H PL C)檢測(cè)腦中組胺、C2氨基丁酸(GA BA)、谷氨酸的含量變化。結(jié)果: 在學(xué)習(xí)過程中, 與對(duì)照組相比, 急性*大電休克僅增加了學(xué)習(xí)過程中的參考記憶錯(cuò)誤次數(shù), 同時(shí)使大鼠海馬內(nèi)GA BA含量增加。而慢性經(jīng)耳電點(diǎn)燃癲癇在空間記憶再現(xiàn)過程中, 大鼠工作記憶和參考記憶錯(cuò)誤次數(shù)增加并且在完全點(diǎn)燃后持續(xù)近3周。慢性經(jīng)耳電點(diǎn)燃癲癇大鼠在完全點(diǎn)燃24h后海馬CA1區(qū)神經(jīng)元發(fā)生退行性變化, 同時(shí)使大鼠海馬組胺含量減少。結(jié)論: 不同種癲癇對(duì)認(rèn)知功能的影響不同: (1)急性*大電休克損傷了空間學(xué)習(xí)能力, 可能與異常的突觸可塑性及海馬內(nèi)的GA BA含量上升有關(guān); (2)慢性經(jīng)耳電點(diǎn)燃癲癇誘發(fā)了空間記憶再現(xiàn)障礙, 可能與海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的病理改變及海馬內(nèi)組胺含量的下降有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]　癲癇ö病理生理學(xué); 記憶障礙ö病因?qū)W; 參考記憶; 工作記憶; 動(dòng)物, 實(shí)驗(yàn)

　　癲癇是一種常見病, 其發(fā)病率為0. 5% ,癲癇所造成的危害不僅在于癲癇發(fā)作本身, 還在

于反復(fù)發(fā)作的慢性癲癇所致的學(xué)習(xí)記憶障礙等認(rèn)知和行為異常。普 遍 認(rèn) 為, 癲 癇 影 響 了 認(rèn) 知 功 能。Sa rk isian等報(bào)道, 單純的海人藻酸注射引起了癲癇狀態(tài)的持續(xù)發(fā)作, 同時(shí)也導(dǎo)致了嚴(yán)重的組織缺損和記憶障礙。慢性戊四唑化學(xué)點(diǎn)燃引起組胺活性下降, 同時(shí)導(dǎo)致了空間記憶障礙。然而, 關(guān)于癲癇和認(rèn)知也有不同的甚至相反的報(bào)道, 慢性癲癇雖然不同程度地影響了認(rèn)知的形成和維持, 但癲癇對(duì)認(rèn)知功能的作用并不都是負(fù)面的。例如, 杏仁核點(diǎn)燃大鼠在空間學(xué)習(xí)和社交關(guān)系實(shí)驗(yàn)中顯示與正常對(duì)照組無明顯差異, 急性*大電休克(M ES)對(duì)被動(dòng)回避反應(yīng)沒有明顯的影響。我們的前期實(shí)驗(yàn)中建立了慢性經(jīng)耳電點(diǎn)燃癲癇的大發(fā)作模型, 并發(fā)現(xiàn)可導(dǎo)致大鼠被動(dòng)回避反應(yīng)記憶保持能力的下降。本實(shí)驗(yàn)擬利用放射狀八臂迷宮, 測(cè)定急性M ES和慢性經(jīng)耳電點(diǎn)燃癲癇對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶的影響。

1　材料和方法

1. 1　動(dòng)物和分組　SD 大鼠180只, 雄性, 體重220～270g(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提

供, 清潔級(jí)Ê級(jí), 證書號(hào): 2229601018)。隨機(jī)將大鼠分成急性M ES組、慢性經(jīng)耳電點(diǎn)燃癲癇

組、對(duì)照組, 每組又分成學(xué)習(xí)組和記憶再現(xiàn)組,每組30只大鼠。每只大鼠每天12h的光照ö12

h黑暗。溫度(22～26℃)、濕度(40%～70%),自由飲水, 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中限制進(jìn)食, 保持體

重為自由進(jìn)食體重的80%～85% ,行為學(xué)實(shí)驗(yàn)安排在10: 00～17: 00進(jìn)行。

1. 2　急性M ES模型　用德國(guó)H ugoSach s電刺激器(H ugoSach sT yp e221,F re ibu rg), 經(jīng)雙

耳夾電極僅給予1次50H z的方波脈沖、150mA、0. 2 s刺激誘發(fā)全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作。如果出現(xiàn)后肢強(qiáng)直性伸展(即后肢伸展程度與身體平行)則為標(biāo)準(zhǔn)的*大電休克(M ES)。

1. 3　慢性經(jīng)耳電點(diǎn)燃模型　每日用鱷魚夾夾大鼠雙耳, 給予閾下電刺激(40mA, 0. 2 s), 24

h1次。對(duì)照組給予鱷魚夾夾大鼠雙耳但無電流通過。每次刺激后觀察行為變化, 同時(shí)記

錄是否出現(xiàn)后肢強(qiáng)直性伸展(HL E)。若動(dòng)物連續(xù)3次電刺激后均出現(xiàn)后肢強(qiáng)直性伸展, 則認(rèn)

為完全點(diǎn)燃。本實(shí)驗(yàn)中所有慢性經(jīng)耳點(diǎn)燃大鼠在連續(xù)刺激7～10d后均完全點(diǎn)燃。

1. 4　放射狀八臂迷宮學(xué)習(xí)獲得和記憶再現(xiàn)測(cè)試　如前所述, 放射狀八臂迷宮中央?yún)^(qū)直徑

30cm, 向四周以等角度和等長(zhǎng)度延伸八條臂(50cm×12cm)。迷宮高出地面40cm。迷宮周

圍布置各種東西作為參照物。每次訓(xùn)練、測(cè)試過程中, 八臂中只有四臂放置食餌(分別為3、5、6和8號(hào)臂)。

1. 4. 1　放射狀八臂迷宮學(xué)習(xí)過程測(cè)試: 大鼠經(jīng)急性M ES或慢性經(jīng)耳電點(diǎn)燃24h后, 開始放射狀八臂迷宮學(xué)習(xí)。在學(xué)習(xí)前大鼠先在迷宮中適應(yīng)2天, 每天1次。適應(yīng)時(shí)3～4只大鼠同時(shí)置于迷宮中, 自由活動(dòng)和攝取餌10m in。適應(yīng)后進(jìn)行每天1次的訓(xùn)練。大鼠放在迷宮中央?yún)^(qū), 此時(shí)中央?yún)^(qū)四周用門關(guān)住, 15 s后, 門開放, 大鼠可選擇進(jìn)入任意一臂, 以攝取食餌。大鼠進(jìn)入有餌的臂且攝取了餌為一次正確選擇, 否則為錯(cuò)誤選擇。記錄參數(shù)為錯(cuò)誤選擇的次數(shù)。重新進(jìn)入放食餌臂稱為工作記憶錯(cuò)誤(w o rk ingm em o rye r ro r,WM E), **次進(jìn)入不放食餌臂稱為參考記憶錯(cuò)誤(refe rencem em o rye r ro r,RM E)。

1. 4. 2　記憶再現(xiàn)過程: 再現(xiàn)組大鼠同上方法,先進(jìn)行迷宮訓(xùn)練, 連續(xù)5次訓(xùn)練總錯(cuò)誤選擇次

數(shù)為1次或1次以下, 認(rèn)為訓(xùn)練成功。然后給予慢性經(jīng)耳電點(diǎn)燃和急性M ES, 至完全點(diǎn)燃24h后或急性M ES(前幾天如對(duì)照組給予鱷魚夾夾大鼠雙耳但無電流通過, *后**再給予M ES)24h后及第7、11、14、18、21、28、31天, 在同一八臂迷宮測(cè)記憶的再現(xiàn)過程, 整個(gè)測(cè)定過程參照物體和放食餌臂同訓(xùn)練過程一致。

1. 5　腦內(nèi)組胺、GA BA和谷氨酸含量的測(cè)定　大鼠在給予M ES或完全點(diǎn)燃24h后,

M ES組、點(diǎn)燃組和對(duì)照組分別取6只大鼠, 用過量水合氯醛麻醉后, 斷頭取腦, 置于不銹鋼板上(不銹鋼板下有冰), 依次取出皮層、海馬組織, 儲(chǔ)存在- 80℃冰箱里備測(cè)。將腦組織置于含有3%高 氯 酸、5mm o löL 乙 二 胺 四 乙 酸 鈉(ED TA)和52氫2N2X甲基色胺的溶液中, 在冰浴下勻漿, 然后在- 4℃環(huán)境溫度下離心20m in(15000g)。取上清, 用0. 22 Lm的二氟聚乙二烯膜濾過。采用本實(shí)驗(yàn)室自行設(shè)計(jì)的高效液相色譜法(H PL C)結(jié)合電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)樣品中組胺、GA BA及谷氨酸含量。整個(gè)系統(tǒng)由582泵、542自動(dòng)進(jìn)樣器、四通道的Co u lA r ray電化學(xué)探測(cè)器組成。用Co u lA r ray○R軟件控制系統(tǒng)作數(shù)據(jù)收集和分析。

1. 6　海馬病理切片　大鼠在給予M ES或完全點(diǎn)燃24h后, 過量水合氯醛麻醉, 從主動(dòng)脈灌

注生理鹽水200m l, 然后4%多聚甲醛溶液200m l灌注, 灌注結(jié)束后立即取腦, 室溫下置4%多聚甲醛溶液及30%蔗糖溶液中至少1周。行冠狀冰凍切片, 片厚12Lm。切片以蘇木精和伊紅染色、封片(H E染色)。在顯微鏡下觀察海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)。

1. 7　 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 處 理 　 采 用SP SS 11. 5 fo rW indow s統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的分析處理。數(shù)據(jù)均采用xq±sxq表示。組間比較如方差齊性, 采用單因素方差分析和D unne t t’s 檢驗(yàn), 方差不齊則采用K ru ska l2W a llisH檢驗(yàn)和D unn’s檢驗(yàn)。