摘要: 目的 研究中國林蛙卵油(egg oil of Rana temporaria chensinensis David ,EORTCD)的抗焦慮
作用。方法 應(yīng)用高架十字迷路和小鼠爬梯實驗評價中國林蛙卵油的抗焦慮活性及其量效、時效關(guān)
系。結(jié)果 與對照組比較,EORTCD 210、 410 g· kg- 1
能顯著延長大鼠在十字迷路開放通路連續(xù)停留時
間,增加大鼠進入開放通路次數(shù),而對封閉通路連續(xù)停留時間和進入封閉通路次數(shù)無明顯影響;小鼠
爬梯實驗中,EORTCD 114～516 g· kg- 1
組小鼠站立數(shù)明顯減少而爬梯數(shù)無顯著差異;EORTCD抗焦
慮時效實驗表明在給藥后 30、 60 min抗焦慮活性較強;γ 2氨基丁酸(γ 2aminobutyric acid , GABA) 50、
100 mg· kg- 1
分別與 EORTCD 112 g· kg- 1
聯(lián)合給藥組的小鼠站立數(shù)顯著降低而爬梯數(shù)無顯著減少,
且比單獨給予 EORTCD組小鼠站立數(shù)少。結(jié)論 中國林蛙卵油有明顯抗焦慮作用。
關(guān)鍵詞: 卵油; 中國林蛙; 抗焦慮; 高架十字迷路; 小鼠爬梯
中圖分類號: R 96 　　　 文獻標識碼: A
　　隨著現(xiàn)代社會的飛速發(fā)展、競爭的加劇 ,很多
人曾經(jīng)歷過焦慮狀態(tài)。焦慮通常是由預(yù)先知道但
又不可避免的、即將發(fā)生的惡性事件引起的一種
預(yù)期反應(yīng) ,以恐懼、憂慮、緊張不安等精神障礙為
主要表現(xiàn) ,并伴有心悸、多汗、呼吸窘迫、手腳發(fā)涼
等植物神經(jīng)功能紊亂。許多內(nèi)科**的疼痛、恐
懼也可引起焦慮 ,如患帕金森氏病、原發(fā)性膽汗性
肝硬化、偏**、糖尿病、心臟病、軀體障礙等病癥
的患者患焦慮障礙的比例較高;某些**如茶堿
也有致焦慮的**反應(yīng)。臨床上根據(jù)焦慮內(nèi)容不
同分為現(xiàn)實性焦慮和期待性焦慮。無論哪種焦慮
都會給人們的生活、學(xué)習(xí)和工作帶來不可預(yù)期的
潛在危害。
中國林蛙是我國傳統(tǒng)名貴補品和滋補性中藥
材 ,*早見于《飲片新參》,記載中國林蛙性涼、味
咸、入肺腎經(jīng) ,具有養(yǎng)肺滋腎的功效。白求恩醫(yī)大
李成義教授分析證明中國林蛙卵中含有多種氨基
酸、三十多種微量元素、多種不飽和脂肪酸、維生
素D、維生素 E、雌**、孕**、脂肪酸等生物活
性物質(zhì) ,具有降血脂、抑制血小板聚集、對抗自由
基的升高等作用[1 ,2 ]
。作者采用 CO2 超臨界萃取
技術(shù)提取其脂溶性物質(zhì)[3 ]
,其**抑制活性本課題組已經(jīng)報道[4 ]
,然而其抗焦慮作用尚未見文獻
報道 ,因此作者采用焦慮模型考查中國林蛙卵油
的抗焦慮作用 ,旨在尋找更好的抗焦慮**。
1 　材料
111 　試藥
中國林蛙卵油(沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院 ,為 CO2
超臨 界 萃 取 獲 得 的 黃 色 油 狀 液 體 , 批 號:
20000417) ;色拉油 (天津北海糧油工業(yè)有限公
司) ;氯硝安定(徐州第三制藥廠恩華藥業(yè)集團 ,批
號:20011201) ;γ 2氨基丁酸(上海試劑三廠 ,批號:
990521) 。Wistar大鼠 ,鼠齡 6～7 周 ,體質(zhì)量 140～
160 g ;昆明種小鼠 ,體質(zhì)量 18～22 g ,雌雄兼用 ,
均由沈陽藥科大學(xué)動物中心提供 ,動物合格證為
遼實動質(zhì)字[2000 ]042 號。動物飼養(yǎng)于12 h光照
(8 :00～20 :00) 、 12 h黑暗、隔音的動物室內(nèi) ,自由
攝食、飲水 ,適應(yīng)以上環(huán)境 1 周后進行實驗。
113 　儀器
11311 　大鼠高架十字迷路
十字迷路為木質(zhì)結(jié)構(gòu) ,漆成黑色。包括 2 個50 cm×10 cm的相對開臂 (open arms) 和 2 個
50 cm×10 cm ×40 cm的相對閉臂(close arms) ,
閉臂上部敞開。迷路中央有10 cm ×10 cm的開
闊部 ,迷路離地面50 cm。
11312 　小鼠爬梯
一個封閉的玻璃箱 ,內(nèi)有 5 級215 cm高的相
同樓梯 ,樓梯側(cè)壁高度保持恒定 ,以使動物在樓梯
的所有水平都有相同的站立分布。
2 　方法與結(jié)果
211 　對大鼠高架十字迷路行為活動的影響[ 5 ,6]
大鼠80 只,體質(zhì)量 140～160 g ,雌雄各半,按
體質(zhì)量、性別均衡隨機分成5組:空白對照組(等容
量色拉油) 、陽性對照組(氯硝安定2 mg· kg - 1
) 、
EORTCD組(110、 210、 410 g· kg - 1
) ,所有實驗在
18 :00～21 :00點進行。灌胃給藥30 min后,將大鼠
置于高架十字迷路中央,頭朝閉臂,觀察者距離迷路中心112 m。記錄實驗期(5 min)內(nèi),大鼠分別進
入開臂及閉臂的次數(shù)和滯留時間(以四肢全部入臂
或出臂為準) 。觀測指標:中央出發(fā)室潛伏時間和
停留時間,開放通路和封閉通路連續(xù)停留時間,開
放通路和封閉通路進入次數(shù)。
與空白對照組比較 ,灌胃給藥 EORTCD 210
410 g· kg - 1
能顯著延長大鼠在開放通路連續(xù)停留
時間 ,顯著增加開放通路時間占兩通路進入時間
總和的百分比( P < 0105) ; EORTCD 各組大鼠進
入封閉通路連續(xù)停留時間減少但無明顯差異 ,如
圖 1 所示。EORTCD對大鼠在開放通路和封閉通
路進入次數(shù)的影響如圖 2 所示: 氯硝安定
EORTCD對大鼠進入封閉通路次數(shù)無明顯影響
112 　動物而能增加大鼠進入開放通路次數(shù)并有顯著性差
異 ,且進入開放通路次數(shù)占兩通路次數(shù)總和的百
分比顯著增加( P < 0105) 。各組大鼠總活動(開
放通路進入次數(shù)和封閉通路進入次數(shù)之和)無顯
著差異( P > 0105) ?！　》?EORTCD的大鼠 ,其開放通路停留時間
延長和開放通路進入次數(shù)增加均提示 EORTCD
有抗焦慮作用 ,對大鼠出發(fā)潛伏時無明顯影響 ,但
延長 EORTCD組大鼠中央出發(fā)室停留時間 ,如表
1 所示。1 1
212 　對小鼠爬梯( the staircase test ) 行為的影
響[ 7 ,8]
小鼠 100 只 ,雌雄各半 ,按體質(zhì)量、性別均衡
隨機分為 5 組 ,灌胃給藥?？瞻讓φ战M(等容量色
拉油) 、陽性對照組 (氯硝安定 2 mg· kg - 1
) 、
EORTCD組(114、 218、 516 g· kg - 1
) ,給藥30 min
后將小鼠置于箱的底部 ,背朝樓梯 ,用數(shù)碼攝像機
拍攝小鼠行為 ,實驗者離開以減少干擾。記錄
3 min內(nèi)小鼠爬梯數(shù)(以四肢都爬上樓梯為準)和
站立數(shù)。每天 18 :00～21 :00 點紅燈下進行實驗 ,
每只動物實驗結(jié)束后迅速清潔實驗箱 ,以排除嗅
覺暗示對下一只動物的干擾。
根據(jù) Simiand等在 1984 年對 Thiebot 建立的
大鼠爬梯實驗進行改進后用于小鼠的實驗設(shè)計 ,
當(dāng)小鼠被引入一個新環(huán)境時會出現(xiàn)焦慮反應(yīng) ,如
警覺性行為增加。爬梯行為評價探究行為或活動
性的指標 ,直立則作為焦慮狀態(tài)的參數(shù) ,抗焦慮劑
在不減少爬梯數(shù)的劑量下使站立數(shù)減少。從表 2
可見:服用 EORTCD 組的小鼠與空白對照組比
較 ,爬梯數(shù)雖然減少但無顯著差異 ,而站立數(shù)卻均
顯著減少。提示 EORTCD具有抗焦慮作用 ,且呈
一定劑量依賴性關(guān)系。
213 　中國林蛙卵油抗焦慮時效實驗[ 7 ,8]3 　討論
本研究采用的兩種實驗為篩選抗焦慮或焦慮
源性**的標準工具 ,快速簡便 ,因此在精神藥理
學(xué)研究中使用非常普遍。EPM( the elevated plus2
mazetest)由 Montgomery (1955)的工作發(fā)展而來
的 ,1984 年 Handley 和 Mithani 用來研究各種α
腎上腺素受體激動劑及拮抗劑的不同作用。一年
后 ,Pellow 及其同事通過大量實驗研究 ,將它發(fā)展
成為一種能有效評價大鼠焦慮狀態(tài)的動物模型。
EPM實驗利用動物對新異環(huán)境的探究特性和對
高懸敞開臂的恐懼形成動物的矛盾沖突來考察大
鼠的焦慮狀態(tài)。十字迷路離地面50 cm相當(dāng)于人
站在峭壁上 ,大鼠會產(chǎn)生恐懼和不安心理。
EORTCD顯著延長大鼠開放通路連續(xù)停留時間并
增加開放通路進入次數(shù)提示 EORTCD 有抗焦慮
作用。在小鼠爬梯實驗中 ,站立也與動物的運動
活動能力有關(guān) ,具有運動失調(diào)作用的**均可減
少站立數(shù) ,但同時減少爬梯數(shù) , EORTCD 在不減
少小鼠爬梯數(shù)的情況下使站立數(shù)減少 ,提示其有
抗焦慮作用 ,與 EPM 顯示相同結(jié)論。中國林蛙
卵油抗焦慮時效實驗也表明 EORTCD 在30 min
和60 min抗焦慮活性*強。
γ 2氨基丁酸( GABA)是哺乳動物**神經(jīng)系
統(tǒng)中廣泛分布的一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì)。約 50 %
的**突觸部位是以 GABA 作為**傳導(dǎo)遞質(zhì)
通過其特異受體( GABAA2C)介導(dǎo) ,在應(yīng)激和焦慮
的藥理學(xué)、神經(jīng)化學(xué)等方面起重要作用。其中
GABAA 受體是三者中*為重要的一種 ,也是與焦
慮有關(guān)的**的靶標。當(dāng) GABA 與受體結(jié)合后
會導(dǎo)致細胞膜上 Cl
-
通道開啟 ,在多數(shù)情況下胞
內(nèi)離子濃度低于胞外 ,Cl
-
順濃度差進入胞內(nèi) ,胞
內(nèi)膜電位增加而產(chǎn)生超極化 ,從而抑制神經(jīng)元興
奮[9 ]
。實驗結(jié)果證明 ,在 GABA 單獨應(yīng)用抗焦慮小鼠 70 只 ,雌雄各半 ,按體質(zhì)量、性別均衡隨作用不明顯的劑量下 ,EORTCD與 GABA 合用能
加強 EORTCD抗焦慮效果。
關(guān)于中國林蛙卵油抗焦慮的機制尚不十分清
楚 ,可以進行與焦慮有關(guān)的 γ 2氨基丁酸 A
(GABAA)2BDZ受體復(fù)合體( GBRC) 、 52HT受體膽囊收縮素(CCK)受體、 NMDA2受體復(fù)合體和神
經(jīng)活性類固醇( neuroactive steroids ,NAS)受體等
多個神經(jīng)系統(tǒng)的研究進一步揭示其作用機理[10 ]
。
中國林蛙卵油是具有多種生物活性物質(zhì)的混合
物 ,如果其能同時作用于介導(dǎo)焦慮的不同受體或
受體亞型 ,可能較作用于單一受體的化合物更有
優(yōu)勢。而且其來源于無污染的天然動物 ,并采用
無溶劑殘留的 CO2 超臨界萃取技術(shù)進行提取 ,長
期毒性實驗證明中國林蛙卵油無明顯的**神經(jīng)
退化作用和肌萎縮作用[11 ]
,提示中國林蛙卵油有
可能成為一種新型的抗焦慮**。、
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